工作原理:
本试剂盒采用重组酶介导等温核酸扩增(Recombinase Aided Amplification,RAA)技术对检测目标序列进行扩增,产物可通过琼脂糖凝胶电泳进行检测。
RAA是一种等温核酸扩增技术,在等温条件下(通常为39℃),重组酶和引物形成蛋白/单链核苷酸的复合体 Rec/ssDNA,在辅助蛋白和单链结合蛋白 SSB 的帮助下,侵入双链DNA 模板;在侵入位点形成 D-loop 区域,并开始对 DNA 双链进行扫描;待找到与引物互补的目的区域后,复合体 Rec/ssDNA 解体的同时,聚合酶也结合到引物的 3′ 末端,以样品DNA为模板,30 ~ 40 min即可实现对目的基因片段的高效扩增。
正、反向引物建议的设计长度为30 ~ 35 nt之间,长度通常长于PCR引物。引物过短可能会降低反应重组率,响扩增速度和检测灵敏度;引物过长则有可能形成二级结构而影响扩增。引物浓度应根据模板的浓度进行筛选,以确定最佳浓度,提升扩增效率。扩增片段的长度推荐为150 ~ 300 bp,通常不超过 500 bp。注意,模板DNA片段过长或出现重复序列时,扩增的准确性会降低。
检测灵敏度:
本试剂盒检测极限约为1×102拷贝/反应(试剂盒的检测灵敏度与目的序列的GC含量及引物的扩增效率有关)。
包装规格:48次,货号JY0200。
RAA核酸扩增试剂盒的储存条件:-20℃避光保存,有效期14个月,避免重压和反复冻融。反应单元开封后,须当天用完。
本试剂盒检测下限1×102拷贝/测试(试剂盒的检测灵敏度与目的序列的GC含量及引物的扩增效率有关