特点:
Cas12a核酸酶是依赖于 RNA 介导的内切核酸酶,靶标DNA存在 PAM 的情况下,可特异地切割靶标双链DNA。与Cas9不同的是, Cas12a:(1)只需单个crRNA,且体积更小、更易被递送至细胞中;(2)切割后产生粘性末端,更利于基因组精确编辑;(3)切割位点远离其识别位点,为连续多次编辑提供了可能性;(4)识别的 PAM 序列与 Cas9 不同,因此提供了不同编辑位点的选择;针对不同的 Cas12a 蛋白,其识别靶标所需的 PAM 位点不同,其中部分 Cas12a 蛋白识别 TTN 位点,部分 Cas12a 蛋白识别 TTTN 位点。
本产品不含任何除 Cas12a 外的任何其它核酸酶活性。
包装量与储存条件:
JY0303包装量为JY0303-S和JY0303-L,其中crRNA保存于-80℃防止降解,其余各组分保存于-20℃:
名称 | JY0303-S | JY0303-L |
Cas12a Nuclease | 100 pmol (10 pmol/μL) | 1000 pmol (10 pmol/μL) |
10 × Cas12a Buffer | 40 µL | 400ul |
使用方法:
1、按下表,配制反应体系,并混合均匀。
名称 | 体积 | 终浓度 |
10 × Cas12a Buffer | 3 μL | 1× |
1 μM LbCas12a Nuclease | 1 μL | 33 nM |
500 nM crRNA | 2 μL | 33 nM |
2 μM ssDNA Reporter | 6 μL | 400 nM |
1 μM 底物DNA(RPA或RAA扩增产物等) | 0.1 μL | 3.5 nM |
Nuclease-free H2O | up to 30 μL |
2、 37℃孵育1h,85℃ 10min灭活Cas12a核酸酶。