SUPERSWITCH™ RACE cDNA合成试剂盒通过扩增基因的5’和3’末端精细、有效地完整克隆基因。SUPERSWITCH™ RACE方法可有效地在样品cDNA 5 ‘和3 ‘末端加入人工接头,尽可能地形成最完整的RACE产物。反转录步骤后合成的第一链cDNA可直接用于5’和3’ RACE PCR反应,无需再进行繁复的第二链cDNA合成和接头连接的过程。其他RACE方法均因扩增的高背景和截短的5 ‘末端而存在明显的劣势。优化后的方法既便是在样本很小的情况下,也可以显著降低非特异性的扩增,且只需单一PCR管和两步法的程序就可使您的RNA样品合成cDNA。
此外,SUPERSWITCH™技术由于避免了接头连接的步骤,在RACE PCR过程中直接使用cDNA作为模板,从而降低了RACE的过程的复杂性,并使其更快捷(Chenchik et al,1998),操作时间更缩短至4个小时。
SUPERSWITCH™ PCR RACE Kit也对PCR过程也进行了优化,增加RACE反应的灵敏性的同时,降低了试验背景。因此,试验者可用很少的mRNA或是总RNA作为反转录的模板来构建全长cDNA。
技术流程:
试剂盒组成:
根据试验样品购买相应的试剂盒,以达到最好的试验效果!
目的 |
试剂 |
ST0011/ ST0091/ ST0111 |
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S/5次 |
L/10次 |
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反 转 录 |
1 | ●SUPERSWITCH™ 3RRT1 Oligonucleotide |
6μL |
12 μL |
2 | ●SUPERSWITCH™ 3RRT2 Oligonucleotide |
6μL |
12 μL |
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3 | ●dNTP Mix (10 mM) |
20 μL |
40 μL |
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4 | ●Deionized H2O |
100 μL |
100 μL |
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5 | ●5X First-Strand Buffer (RNase-Free) |
30 μL |
60 μL |
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6 | ●SUPERSWITCH™ SolutionⅠ |
5 μL |
10 μL |
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7 | ●SUPERSWITCH™ SolutionⅡ |
5 μL |
10 μL |
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8 | ●RNase Inhibitor (40 U/μL) |
6 μL |
12 μL |
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9 | ●SUPERSWITCH™ Reverse Transcriptase (200 U/μL) |
6 μL |
12 μL |
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10 | ●SUPERSWITCH™ 5RRT Oligonucleotide |
6 μL |
12 μL |
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PCR | 11 | ●5AP PCR Primer (12 μM) |
30 μL |
60 μL |
12 | ●3AP PCR Primer (12 μM) |
30 μL |
60 μL |
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13 | ●10×SUPERSWITCH™ Hot Start Buffer |
100 μL |
200 μL |
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14 | ●dNTP Mix (2.5 mM of each dNTP) |
200 μL |
400 μL |
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15 | ●SUPERSWITCH™ Hot Start DNA polymerase(5U/μL) |
10 μL |
20 μL |