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Pacbio做为三代测序的先驱，SMRT技术为我们提供了科研的更多可能。在三代转录组测序，只有clontech一个品牌为PacBio提供配套的试剂盒。Tiosbio的出现为科研领域增加了选择。Tiosbio根据PacBio的技术特点。进行了大量的优化和改进。使整个操作程序由原来的2天时间缩短到8个小时以内。Tiosbio推出了SUPERSWITCH^®
三代转录组建库试剂盒。SUPERSWITCH™第三代测序转录组文库构建试剂盒提供了一种基于PCR方式从纳克级总RNA合成高质量cDNA的方法。SUPERSWITCH™第三代测序转录组文库构建试剂盒cDNA合成技术是基于RNA转录5’末端跳转机制 (Switching Mechanism at 5′ End of RNA Template，SMART) 技术。SMART技术非常适合起始样品量有限的材料，能够以2 ng总RNA（或极低浓度样本）合成的高质量cDNA，用于杂交探针、”Virtual Northern” blots、cDNA测序及其他应用。

本试剂盒的5’和3’采用不同的接头引物，在原始数据上就能直接判读resds的来源是mRNA还是cDNA。
本试剂盒采用SUPERSWITCH^®
技术，生成高质量的双链cDNA。满足nanopore的上机要求。
本试剂盒的建库产物，可以直接连接PacBio的环状测序接头。省略了DNA的损伤修复和DNA的末端修复2个主要步骤。使操作时间大大的缩短。
本试剂盒的模板为样本的总RNA,最大限度的反应了样本的转录组的均一性。
本试剂盒根据PacBio的读长特点，增加了纯化步骤，使产物的起始长度为400bp。大大节省了测序资源。

包装量及储存条件

试剂盒组分：

试剂盒1

目的	试剂		PacBio		Nanopore
			SP0021		SN0021
			M/10次	L/20次	M/10次	L/20次
反转录	1	●SUPERSWITCH™ 3RRT Oligonucleotide	12μL	24 μL	6μL	12μL
	2	●dNTP Mix (10 mM)	40 μL	80 μL	20 μL	40 μL
	3	●Deionized H₂O	100 μL	100 μL	100 μL	100 μL
	4	●5X First-Strand Buffer (RNase-Free)	60 μL	120 μL	30 μL	60 μL
	5	●SUPERSWITCH™ SolutionⅠ	10 μL	20 μL	5 μL	10 μL
	6	●SUPERSWITCH™ SolutionⅡ	10 μL	20 μL	5 μL	10 μL
	7	●RNase Inhibitor (40 U/μL)	12 μL	25 μL	6 μL	12 μL
	8	●SUPERSWITCH™ Reverse Transcriptase (200 U/μL)	12 μL	25 μL	6 μL	12 μL
	9	●SUPERSWITCH™ 5RRT Oligonucleotide	12 μL	24 μL	6 μL	12 μL
PCR	10	●5AP PCR Primer (12 μM)	100 μL	200 μL	100 μL	200 μL
	11	●3AP PCR Primer (12 μM)	100 μL	200 μL	100 μL	200 μL
	12	●Marathon DNA Polymerase（1U/μL）	24μL	48μL	24 μL	48 μL
	13	●2×PCR Buffer	765μL	1530 μL	765μL	1530 μL
	14	●2.5 mM dNTP	160μL	320 μL	200 μL	400 μL

试剂盒2：Tiosbio™ 200bp Cleaner

目的	试剂		PacBio		Nanopore
目的	试剂		M/30次	L/60次	M/30次	L/60次
PCR 产物纯化	1	○Buffer P5	7.5 mL	15 mL	15 mL	30 mL
PCR 产物纯化	2	○Wash Buffer	3.25 mL	6.5 mL	6.5 mL	13 mL

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