Tiosbio® RNAfixer 是一种水相、无毒的组织保存液体,可迅速渗入新鲜组织细胞的胞浆中,在非冷冻状态下原位稳定和保护细胞内的RNA。适用于动物组织(心、肝、肾、肌肉、睾丸、脑、脾等)、培养细胞、RNA 病毒、果蝇、细菌、白细胞、全血和某些植物组织等。
组织样品浸入RNAfixer后,新鲜组织细胞中RNA可以完好的在37℃保存一天,25℃保存一周,4℃保存一个月,在-20℃或-80℃长期保存。RNA 病毒样品(如HCV、HIV)可在37℃保存一个月。
1.操作简便:将样品剪成适当大小,浸没于RNAfixer中,即可使样品RNA不被降解。
2.无需液氮:样品保存无需液氮、干冰或-80℃冰箱,尤其适用于临床和野外样品的快速、大规模采集。
3.便于运输:处理过的样品可于25℃保存一周,便于样品的邮寄和运输。
4.耐受多次冻融:经RNAfixer处理的样品可反复冻融,并对样品进行处理而不影响最终提取的总RNA质量。
5.瞬时固化样品的表达谱,可在批量样品采集时降低处理误差,增加不同生物学重复和平行试验结果的可信度,尤其适用于大规模的基因表达谱分析。
6.适用性广:多种总RNA提取试剂均都可用于RNAfixer保存样品。Tiosbio® RNAfixer固定的样本可直接用于组织切片、免疫学和流式细胞分析,且不影响RNA提取的质量。
TR0020S为50mL,TR0020L为100mL。室温(15 ~ 25℃)可保存12个月。低温存储会造成RNAfixer产生沉淀,可于37℃水浴数分钟,待溶液恢复澄清后使用。
1.将样本从RNAfixer中取出,残留的RNAfixer可以直接倒入下水管道,无需特殊处理。
2.组织:用无RNA酶的洁净镊子将样品从RNAfixer中捞出,用吸水纸吸去样品表面残留的RNAfixer后,以液氮研磨样品,然后用TIOSzol Reagen(BT0021)匀浆处理提取RNA。
3.细胞:存储于RNAfixer的细胞有两种处理方式,①于细胞和RNAfixer混合物中加入10倍体积的TIOSzol Reagen(BT0021),直接提取总RNA;②离心沉淀细胞,去除RNAfixer后,以TIOSzol Reagen(BT0021)提取RNA。存放于RNAfixer中的细胞可以承受较高的离心速度而不被裂解。建议通过预试验保证使用的转度不会破坏细胞。可在离心前加入等体积的PBS,稀释RNAfixer和细胞的混合物,以降低溶液的密度,利于细胞沉淀。
1.动物组织:RNAfixer不会破坏或者溶解组织结构,因此浸泡在RNAfixer中达到渗透平衡的组织可以从RNAfixer中取出,然后切成更小的样品材料,然后放回到RNAfixer中下次继续使用。某些较小的器官如小鼠的肝、肾和脾组织无需要剪切,即可完整地存放于RNAfixer中。
2.植物组织:很多植物组织可直接浸泡入于RNAfixer,有的植物有天然渗透屏障如腊质保护层,需要先破坏掉腊质层,便于RNAfixer的渗透。
3.组织培养细胞:将细胞吹打下来后,离心收集细胞,弃上清,用冰浴的PBS缓冲液洗涤细胞1次,以去除残留的细胞培养液。将细胞悬浮在少量PBS缓冲液中,加入5~10倍体积RNAfixer混均,即可。
4.血和血浆:红细胞和血清分离的白细胞可以和组织培养细胞一样的保存。RNAfixer也可以保存抗凝全血,血清和血浆。对于全血加入3倍体积RNAfixer混匀。
5.酵母:离心收集3×108的细胞(>12,000g离心两分钟),立刻将细胞团重悬加入0.5~1 mL的RNAfixer。酵母细胞可以保存在RNAfixer中,25℃下保存8小时或4℃下保存一周。如果要保存更长时间,需将酵母细胞在RNAfixer中放置1小时后, 再次于>12,000g离心5分钟,将酵母细胞团放入液氮瞬时冷冻后放置于-80℃储存。
6.细菌:细菌并不能在RNAfixer 中生长,并保持细菌细胞的完整性,大肠杆菌在4℃ 保存一个月仍旧可以提出完整的RNA。