工作原理:

本试剂盒采用重组酶介导等温核酸扩增（Recombinase Aided Amplification，RAA）技术对检测目标序列进行扩增。扩增体系含有正、反向扩增引物和探针。将一条引物/探针标记生物素（Biotin），另一条引物/探针标记异硫氰酸荧光素（FITC）或6-羧基荧光素（6-FAM），探针经过nfo 酶的切割和RAA后，形成了带有两种标记物的双链扩增产物，该产物可使用胶体金技术（三明治夹心法）进行检测。

在等温条件下（通常为39℃），RAA体系内的重组酶和引物形成蛋白/单链核苷酸的复合体 Rec/ssDNA，在辅助蛋白和单链结合蛋白 SSB 的帮助下，侵入双链DNA 模板；在侵入位点形成 D-loop 区域，并开始对 DNA 双链进行扫描；待找到与引物互补的目的区域后，复合体 Rec/ssDNA 解体的同时，聚合酶也结合到引物的 3′ 末端，以样品DNA为模板，12 ~ 20 min即可实现对目的基因片段的高效扩增。

正、反向引物建议的设计长度为30 ~ 35 nt之间，长度通常长于PCR引物。引物过短可能会降低反应重组率，响扩增速度和检测灵敏度；引物过长则有可能形成二级结构而影响扩增。引物浓度应根据模板的浓度进行筛选，以确定最佳浓度，提升扩增效率。扩增片段的长度推荐为150 ~ 300 bp，通常不超过 500 bp。注意，模板DNA片段过长或出现重复序列时，扩增的准确性会降低。

在正、反向引物中间，设计一段长度为 46 ~ 52 nt 与目的片段互补的探针序列。探针序列的5′末端修饰抗原标记（Biotin 或FITC/6-FAM），5′末端和 3′末端的中部位置标记1个 dSpacer（四氢呋喃，THF），作为 nfo 的识别位点，3′末端标记一个修饰基团，例如胺基、磷酸基团或 C3-Spacer 等。

预期用途:

本试剂盒仅供科研使用，适用于各种DNA模板的扩增，核酸扩增产物可使用进行检测。

包装规格：48次，货号JY0202。

RAA核酸扩增试剂盒的储存条件：-20℃避光保存，有效期14个月，避免重压和反复冻融。反应单元开封后，须当天用完。

1. 本产品仅供科研使用。使用前请仔细阅读说明书，严格按照说明书操作。违反或者未按说明书进行操作可能导致错误结果。
2. 产品应依照说明书要求，储存于合适的环境和温度下，并在有效期内使用。储存不当或产品过期可能导致错误结果。
3. 为避免交叉污染，试剂配制区及检测区应分隔开。
4. 实验需设置不加模板的空白对照，以确认是否有待扩增核酸的污染。
5. 如用于病毒等病理样品检测，所有检测样本及试剂均按照传染性物质对待，实验过程中穿工作服，戴一次性手套，并经常更换手套，以做好工作人员的防护并避免交叉污染。
6. 不能使用过有效期的产品。

本试剂盒检测极限约为1×10¹拷贝/反应（试剂盒的检测灵敏度与目的序列的GC含量及引物的扩增效率有关）。