工作原理:

本试剂盒采用重组酶介导等温核酸扩增（Recombinase Aided Amplification，RAA）技术对检测目标RNA序列进行扩增，产物可通过琼脂糖凝胶电泳或Tiosbio^® 一次性核酸检测试纸条（彩虹型）（JY0201）进行检测。

RT-RAA是一种将反转录过程和扩增过程同步进行的等温核酸扩增技术，在等温条件下（通常为39℃），20~40min，以样品RNA为模板，即可实现对目的基因片段的扩增。

本试剂盒可用于科研，要求引物设计长度30~35bp之间，长度通常长于PCR引物。引物过短可能会降低反应重组率，引物过长则有可能形成二级结构。引物浓度应根据模板的浓度进行筛选，以确定最佳浓度，提升扩增效率。扩增片段的长度推荐为80~500bp，模板DNA片段过长或出现重复序列时，扩增的准确性会降低。

预期用途: 

本试剂盒仅供科研使用，适用于各种DNA扩增，核酸扩增产物可采用琼脂糖凝胶电泳进行扩增结果检测。

储存条件及有效期:

RAA核酸扩增试剂盒的储存条件：-20℃避光保存，有效期6个月，避免反复冻融。4℃避光保存，有效期1个月。反应单元开封后，须于24小时内使用完毕。

1. 本产品仅供科研使用。使用前请仔细阅读说明书，严格按照说明书操作。违反或者未按说明书进行操作可能导致错误结果。
2. 产品应依照说明书要求，储存于合适的环境和温度下，并在有效期内使用。储存不当或产品过期可能导致错误结果。
3. 为避免交叉污染，试剂配制区及检测区应分隔开。
4. 实验需设置不加模板的空白对照，以确认是否有待扩增核酸的污染。
5. 如用于病毒等病理样品检测，所有检测样本及试剂均按照传染性物质对待，实验过程中穿工作服，戴一次性手套，并经常更换手套，以做好工作人员的防护并避免交叉污染。
6. 不能使用过有效期的产品。

• 样本采集：各类型样本按照常规方法采集；
• 存放：样本在2~8℃条件下保存应不超过72h，-70℃以下可长期保存，但应避免反复冻融（最多冻融3次）；
• 运输：使用冰盒、泡沫箱加冰密封后，运输。
• 核酸提取：采用核酸提取试剂盒或全自动核酸提取仪，具体提取方法依照试剂盒说明书进行。

1. 反应体系的配制（单个样品/反应）：

建议加样顺序为阴性质控样本、待检样本和阳性对照，每个样本添加完毕后均需立即扣好管盖，避免污染。

*如模板浓度较高，推荐模板RNA加样量为1μL；阴性质控样本推荐使用无核酸酶的双蒸水。

2. 将上述反应体系混匀，加入基础反应单元。使冻干粉充分溶解，注意，该步骤不能使用涡旋振荡器剧烈振荡混匀。
3. 打开反应单元，加入2.5μL乙酸镁，充分混匀并离心收集；注意，该步骤不能用涡旋振荡器剧烈振荡混匀。
4. 将反应管放置在39℃条件下反应20~40min。
5. 反应结束后，将反应管取出。
6. 可以用Tiosbio^®一次性核酸检测试纸条（彩虹型）（JY0201）直接进行检测。
7. 产物纯化后，可进行产物的琼脂糖凝胶电泳检测。每个反应管中加入50μL酚/氯仿（1:1），充分振荡均匀，12000rpm离心1min。注意，该步骤可使用涡旋振荡器剧烈振荡混匀。吸取10μL上清液进行琼脂糖凝胶电泳（胶浓度一般为1.5%~2%）检测。