工作原理:
本试剂盒采用逆转录重组酶介导等温核酸扩增(Reverse Transcription Recombinase Aided Amplification,RT RAA)技术对检测目标序列进行扩增,产物可通过琼脂糖凝胶电泳进行检测。
RT RAA是一种等温核酸扩增技术,在等温条件下(通常为42℃),特殊修饰的反转录酶利用特异性引物 DNA 和模板 RNA 合成 cDNA 链,反应体系中的重组酶、单链结合蛋白SSB和 DNA 聚合酶以新合成的 cDNA 链为模板进行快速核酸扩增反应。适用于实验室级别的 RNA 扩增以及其他检测用途的 RNA 扩增,及DNA模板的扩增使用,具有灵敏度高、特异性强、反应时间短(仅需 30 min)等优点,反应组分为干粉状态,操作简便,易于保存。
正、反向引物建议的设计长度为30 ~ 35 nt之间,长度通常长于PCR引物。引物过短可能会降低反应重组率,响扩增速度和检测灵敏度;引物过长则有可能形成二级结构而影响扩增。引物浓度应根据模板的浓度进行筛选,以确定最佳浓度,提升扩增效率。扩增片段的长度推荐为150 ~ 300 bp,通常不超过 500 bp。注意,模板DNA片段过长或出现重复序列时,扩增的准确性会降低。
预期用途:
本试剂盒仅供科研使用,适用于各种RNA及DNA模板的扩增,核酸扩增产物可采用琼脂糖凝胶电泳进行检测。
包装规格/货号:
包装规格:48次,货号JY0203。
储存条件及有效期:
RAA核酸扩增试剂盒的储存条件:
–20℃避光保存,有效期14个月,避免重压和反复冻融。反应单元开封后,须当天用完。
检测灵敏度:
本试剂盒检测极限约为1×102拷贝/反应(试剂盒的检测灵敏度与目的序列的GC含量及引物的扩增效率有关)。