特点:

Tiosbio^® Simple TA Vector预先偶联TOPO酶，加入PCR扩增产物后可迅速完成连接反应，连接阳性率高。产品适于连接带“A”尾的PCR产物，载体含有氨苄青霉素抗性筛选标记。如与高保真酶扩增得到的平末端PCR产物连接应选择Tiosbio^® Blunt Zero Vector（Cat.No. TD0201）。

该载体连接反应时间可短至5min；操作简单，仅需加入载体和插入片段；无需蓝白斑筛选，阳性率高；不包含任何酶切位点，便于后续亚克隆。

试剂盒组成：

测序引物：

正向测序引物M13F(-47)：5΄- CGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGAC-3΄；

反向测序引物M13R(-48)：5΄- AGCGGATAACAATTTCACACAGGA-3΄。

载体图谱：

• 问题1：平板克隆数少或不长斑

原因：通常是由于感受态效价较低造成，更换感受态可解决该问题。另外平板含100μg/mL氨苄青霉素抗生素，检查抗生素是否用错。

• 问题2：阳性率低

原因：连接PCR产物有引物二聚体，连接产物条带不明亮（浓度不够），连接产物的“A”尾丢失，非Taq酶扩增产物（不带A尾）。

• 问题3：鉴定插入片段大小与预期不符

原因：回收过程中PCR产物发生断裂，形成小片段产物，尤其是大片段回收、连接时尤为严重。菌检产物大小为200bp＋目标产物长度，如插入片段为500bp，则菌检阳性克隆应为700bp。