Tiosbio^® 2× Kappa SYBR Green I qPCR Mix（with ROX）是基于SYBR Green I嵌合荧光法进行Real-Time PCR的2×浓度预混液。

该预混液包括热启动DNA聚合酶、反应Buffer、dNTPs、SYBR Green I等试剂，试验时仅需加入引物、模板、水。热启动DNA聚合酶高温加热前，anti-Taq单克隆抗体与Taq酶结合，抑制Taq酶的聚合酶活性，从而抑制低温条件引物与模板DNA的非特异性杂交，或引物二聚体引起的非特异性扩增。Anti-Taq单克隆抗体在PCR反应第一循环的变性步骤中已完全失活，不会阻碍之后的Taq Polymerase反应，大大提高了PCR反应的灵敏度及特异性。优化浓度的SYBR Green I 荧光染料，特异性地掺入DNA双链后，荧光信号增强，而不掺入链中SYBR Green I染料分子荧光信号不变，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步，荧光可以在退火或延伸阶段测定。

另外，本产品中还添加了Tli RNaseH（耐热性RNaseH），以cDNA作为模板进行PCR反应时，可以很好地抑制由于cDNA中残存mRNA对PCR反应造成的阻害作用。 适合于快速荧光定量扩增反应，可以在宽广的定量区域内得到良好的标准曲线，对靶基因进行准确定量、检测，重复性好，可信度高。

该产品适用的PCR仪包括ABI PRISM7000/ 7700/7900HT，7300/7500/7500 Fast Real-Time PCR，Stratagene的 Mx 3000P等。

TR0203-1为1mL，用量为100次（20μL/次）；TR0203-5为5mL，用量为500次（20μL/次）。

长期保存，请置于-20˚C，有效期24个月。经常使用，可于4˚C保存六个月。

1. 长期-20℃存放可能会产生白色或淡黄色的沉淀，可用手握缓慢溶解，于室温短时间避光放置，轻柔上下颠倒混匀，避免产生气泡，直至沉淀全部消失。沉淀会导致溶液成分不均匀，使用前务必充分混匀试剂，但请勿涡旋振荡混匀！
2. 配制反应液时，试剂请于冰上放置。反应液的配制、分装请务必使用新的（无污染）枪头、Microtube 等。 本产品中含荧光染料 Sybrgreen，配制 PCR 反应液时应避免强光照射。
3. 本产品热启动酶是基于anti-Taq 抗体，与化学修饰型热启动酶相比，无需较长时间的要 PCR 反应前的 95℃、5～15 分钟的酶的活性化反应。如果高温处理时间过长，会使酶的活性下降，其 PCR 的扩增效率、定量准确度等都会受到影响。PCR 反应前模板的预变性通常设定为 95℃、30 秒。另外，某些定量仪器为测定稳定的荧光，延伸时间需要大于30秒。扩增曲线散乱，或者各孔间差异较大时，请根据实例对延伸时间进行调整。
4. 如果两步法程序试验结果未达到预期时，才需要优化PCR反应条件。因引物Tm 值较低，两步法 PCR 反应扩增性能较差时，可以尝试进行三步法 PCR 扩增反应。

如果按照推荐的两步法条件进行反应，反应性能不好时，请按照下面的方法进行引物和 PCR 反应条件的优化。

1. 降低 Primer 浓度有助于提高特异性；提高 Primer 浓度有助于提高扩增效率。
2. 提高退火温度有助于提高扩增反应特异性；增加延伸时间或将扩增程序变更为3步法有助于提高扩增效率。
3. 95℃ 30秒的预变性条件可使环状质粒 DNA和基因组 DNA模板变性，如模板较为复杂，变性时间可延长至1～2分钟。但是变性时间过长，易致酶失活，不推荐变性时间> 2分钟。